QuarCam Plus Seamless Cloning Kit是基于Gibson Assembly原理,针对多片段重组反应进行了优化,可以一次实现 1-12个插入片段(长度 50 bp-12 kb)的无缝拼接克隆。该试剂盒优化了重组酶及缓冲体系,添加了独特的重组增强因子,使得单片段和多片段重组效率同样高效;同时也提高了重组体系对杂质的耐受度,使得线性化载体与插入片段可以不纯化直接用于重组反应,极大的简化了实验步骤。
无缝克隆原理示意图
产品特点
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便捷
一管式反应,线性化载体与插入片段可以不纯化直接用于重组反应。
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高效
高效克隆50 bp-12 kb片段,阳性克隆率高达96%。
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兼容单片段、多片段同源重组
图1. 插入1个和多个片段的阳性克隆鉴定结果
使用QuarCam Plus Seamless Cloning Kit分别进行1个和多个片段的重组实验,结果显示可兼容一个或者多个目标片段的插入连接。(A)带有重组质粒的大肠杆菌细胞在抗性平板上的生长情况。(B)插入1个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。(C)插入4个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。 (D)插入10个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。
克隆阳性率高
重组体系
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插入片段个数
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克隆子总数(个)
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菌落PCR阳性率
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测序阳性率
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总阳性率
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太阳集团 |
插入1个片段 |
988 |
24/24 (100%) |
23/24 (96%) |
96% |
插入4个片段 |
349 |
22/24 (92%) |
18/22 (82%) |
75% |
插入10个片段 |
336 |
20/24 (83%) |
16/20 (80%) |
67% |
友商 |
插入1个片段 |
920 |
24/24 (100%) |
22/24 (92%) |
92% |
插入4个片段 |
286 |
18/24 (75%) |
13/18 (72%) |
54% |
插入10个片段 |
90 |
12/24 (50%) |
6/12 (72%) |
25% |
表1. 插入1个或多个片段的阳性克隆子统计
使用太阳集团和友商产品分别进行1个、4个和10个片段的重组实验,重组产物转化平板后,分别从各自平板挑取24个克隆进行菌落PCR,琼脂糖凝胶电泳显示片段大小正确为阳性;挑取菌落PCR阳性克隆进行一代测序,重组区序列完全正确为阳性。结果显示不管是单片段还是多片段的重组实验 ,其阳性率均优于友商。
订购和规格
产品名称
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货号
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规格
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描述
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QuarCam Plus Seamless Cloning Kit |
NG1002A / NG1002B |
10rxn / 50rxn |
适用1-12个片段 |
QuarCam Seamless Cloning Kit |
NG1001A / NG1001B |
10rxn / 50rxn |
适用1-5个片段 |